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感受态细胞名称：TOP10 Competent cells；TOP10感受态细胞
菌种类型：E.coli
培养基：2YT或LB培养基
产品规格：10×100μl
转化效率：1~5 × 108 cfu/µg pUC19
基因型：F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1araΔ139Δ(ara-leu)7697galUgalKrpsL (StrR)endA1nupG
抗性：链霉素
转化条件：42 ℃热激
培养条件：37 ℃, 有氧
用途：高效的DNA克隆和质粒扩增
储存条件：-80 ℃保存，干冰运输
特点和简介
n 适用于高效的DNA克隆和质粒扩增。能保证高拷贝质粒的稳定复制。其φ80,lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选；
n TOP10菌株来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的菌株之一；
n TOP10生长速度快比DH5α快，但比Mach1 T1生长速度慢；涂板后10小时可见菌落克隆；
n rec A1和end A1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
简化转化步骤
1. 取TOP10感受态细胞置于冰浴融化。
2. 加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。
3. 42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。
4. 加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。
5. 取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。
注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。
注意事项
1. -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。
2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。
3. 混入质粒时应轻柔操作。
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His标签重组蛋白表达与纯化试剂盒说明书334.68 KB
