SpCas9 D10A Nickase

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包装内容：

产品简介：

种属来源：基于野生型SpCas9的基因工程改造变体。

基因工程：通过将SpCas9蛋白第10位的天冬氨酸（D）突变为丙氨酸（A）而获得。这个突变位于RuvC结构域的催化核心，使其失活。

蛋白特性：D10A突变使RuvC结构域完全失活，但HNH结构域功能完好。因此，该蛋白只能切割与sgRNA互补配对的DNA链（TS链），形成单链断裂（缺刻），而不能切割非互补链。

酶活性质：SpCas9 D10A Nickase只能切割TS链，在PAM上游第3个碱基的位置产生单链缺刻，形成5'突出。这种单链断裂通常由高保真的碱基切除修复（BER）途径快速修复，基因编辑效率较低，但脱靶效应显著降低。

应用：主要应用于双切口酶策略，需与SpCas9 H840A Nickase配对使用，在两条互补链上各产生一个缺刻，形成"类DSB"。这种策略将靶向特异性从20bp提高到40bp，显著降低脱靶效应。此外，D10A变体也是碱基编辑器和先导编辑器的重要骨架蛋白。