ISCro4-TM蛋白

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产品简介：

ISCro4-TM， ISCro4三重突变体。野生型 ISCro4桥重组酶（源自 Citrobacter rodentium）的工程化增强版本。包含了三个关键点突变：S30T、P54Q和 S243H。

S30T：该位点（在IS621中为T30）位于Tnp结构域，可能通过与bridge RNA（bRNA）中的特定碱基（如U142）形成氢键来稳定四聚体复合物。S30T突变可能通过引入额外的甲基基团，与邻近的D20残基形成有利的接触，从而增强这种稳定性。

P54Q：该位点（在IS621中为H54）位于一个推测为溶剂暴露的环区。P54Q突变可能通过改善蛋白质的溶解性、促进正确的蛋白质折叠或增强与其他分子的相互作用来提升功能。

S243H：这是最关键的一个突变。S243位于RuvC催化结构域。在催化中心，其主链原子与DNA的磷酸骨架相互作用。S243H突变使得组氨酸（H）的侧链能够与DNA磷酸骨架形成一个新的氢键。

效率倍增：ISCro4-TM在不同靶位点的编辑效率均比野生型ISCro4 consistently提高了约1.5倍。

峰值效率：当ISCro4-TM与最优化的“增强型split bRNA”组合时，在SBF2位点实现了高达 20.2%的插入效率。

特异性保持：重要的是，文章指出，ISCro4-TM在提升效率的同时，并未引入可观测到的脱靶效应增加，其“靶向插入”比例与野生型相当。

参考文献

Perry, N. T. et al. Megabase-scale human genome rearrangement with programmable bridge recombinases. Science eadz0276 (2025) doi:10.1126/science.adz0276.