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基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理。DNase底物(DNase Substrate)为合成的DNA寡核苷酸探针,并标记有荧光基团(Fluorophore)和对应的淬灭基团(Quencher)。当底物被DNase切割后,释放游离的荧光基团即可在490nm处被激发并在520nm处被检测。亦可使用紫外光源激发,目视检测绿色荧光进行初步判定。试剂盒提供DNase标准品作为阳性对照,可定性定量检测样本中DNase酶活。
-20℃储存,一年有效。其中DNase Substrate须避光保存。。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2101-1 | 10X Reaction Buffer | 2ml |
P2101-2 | DNase I (1U/μl) | 20μl |
P2101-3 | 5X DNase I Substrate | 200μl |
P2101-4 | Nuclease-free Water | 20ml |
基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理。DNase底物(DNase Substrate)为合成的DNA寡核苷酸探针,并标记有荧光基团(Fluorophore)和对应的淬灭基团(Quencher)。当底物被DNase切割后,释放游离的荧光基团即可在490nm处被激发并在520nm处被检测。亦可使用紫外光源激发,目视检测绿色荧光进行初步判定。试剂盒提供DNase标准品作为阳性对照,可定性定量检测样本中DNase酶活。
使用说明:
1. 试剂准备
室温平衡混匀10X Reaction Buffer、5X DNase I Substrate和Nuclease-free Water备用。DNase冰浴备用。
用Nuclease-free Water将10X Reaction Buffer稀释为1X。
用1X Reaction Buffer将5X DNase I Substrate稀释为1X。
2. 样品准备。
注意样品不含深色物质以免干扰荧光信号;样品溶液不含DNase抑制性物质,如高离子强度(5M NaCl,20X SSC,3M sodium actate),pH<4或pH>9,离液剂,变性剂,螯合剂等。
3. 标准曲线
将DNase I (1U/μl)用1X Reaction Buffer稀释至适当的浓度梯度。可自行设置为0-0.05U/well。
4. 体系设置
Reagent | Blank Control | Positive Control | Sample |
1X Reaction Buffer | 90μl | 80μl | 80μl |
DNase I | 0 | 10μl | 0 |
Sample | 0 | 0 | 10μl |
1X DNase I Substrate | 10μl | 10μl | 10μl |
Total Volume | 100μl | 100μl | 100μl |
*可设置平行孔或3个复孔检测
5. 检测
振荡混匀1-2分钟,使用荧光酶标仪或荧光定量PCR测定。设置反应温度37ºC,激发波长为490nm、发射波长为520nm。