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包装内容:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P6074 | GeoCas9蛋白 | 1000/2500pmol |
产品简介:
来源于嗜热细菌Geobacillusstearothermophilus(GeoCas9),属于II-C型CRISPR-Cas9核酸酶。
分子量:约1,087个氨基酸,比SpyCas9(1,368aa)更小,结构紧凑,适合递送。
温度适应性:最适活性温度:50–70°C(SpyCas9仅至45°C)。
热稳定性:变性温度比SpyCas9高20°C,支持高温体外反应或嗜热菌基因编辑。
PAM序列:天然PAM:5'-NNNNCRAA-3'(R=A或G)。
工程化变体:通过替换PAM互作域(PIdomain),可识别5'-NNNNGMAA-3',靶点范围翻倍。
sgRNA设计:
tracrRNA长度:≥91nt(过短显著降低活性)。
spacer长度:21–22nt最优(SpyCas9为20nt)。
嵌合sgRNA结构:crRNA-tracrRNA通过GAAA四环连接。
体内外性能:
哺乳动物细胞编辑:RNP递送后,在HEK293T中编辑效率与SpyCas9相当。
血浆稳定性:在人血浆中37°C孵育8小时后仍保留活性,半衰期显著优于SpyCas9(后者1.5小时内失活)。
无末端修剪活性:切割后产生平末端,提升编辑可预测性。
独特优势:
高温与体内双兼容:唯一同时支持嗜热菌编辑和哺乳动物RNP递送的Cas9。
递送友好:体积小+血浆稳定性高,适合AAV或脂质体递送。
天然多样性利用:无需蛋白工程即可获得高稳定性,优于人工定向进化。
GeoCas9填补了高温CRISPR应用的空白,兼具热稳定性、紧凑结构和体内长效性,是嗜热生物工程与体内基因治疗的理想工具。
参考文献
Harrington, L. B. et al. A thermostable Cas9 with increased lifetime in human plasma. Nat. Commun. 8, 1424 (2017).