T7 DNA Ligase

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包装内容

产品简介

T7 DNA连接酶来源于T7噬菌体，是一种ATP依赖型双链DNA连接酶。该酶可催化双链DNA相邻的5´-磷酸基团和3´-羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA连接酶可有效催化粘性末端和切刻的连接。不过，与T4和T3 DNA连接酶不同，T7 DNA连接酶不能有效催化平末端连接。在典型的反应条件下，T7 DNA连接酶不会催化平末端DNA连接；因此，当DNA平末端和粘性末端同时存在时，仅需粘性末端发生连接，T7 DNA连接酶是理想的选择。

可用于克隆限制性内切酶消化生成的DNA片段；将连接子或接头与双链DNA相连；线性DNA环化；双链DNA切刻位点连接；定点突变。

来源于大肠杆菌，含有编码T7 DNA连接酶的重组基因。

1单位是指在20 μl总反应体系，1X T7 DNA连接酶反应缓冲液中，25℃条件下30分钟能使50%的经HindIII消化的100 ng λ连接所需的酶量。

使用说明

ATP是反应中必不可少的辅因子。这与需要NAD作为辅因子的E. coli DNA连接酶不同。

如果稀释酶需要在-20℃条件下长期储存，应使用含有50%甘油的贮存缓冲液稀释。

65℃加热10分钟，可使T7 DNA连接酶失活。不过，反应需要在不含PEG的缓冲液中进行。

在10–20 μl反应体系中标准载体 + 插入片段的连接，通常是25℃条件下反应30分钟。