T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)

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包装内容

产品简介

T4多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失）可催化ATP的γ位磷酸基团转移或交换至双链和单链DNA、RNA的5´-羟基末端，以及核苷3´-单磷酸。该变体具有完整的激酶活性，但不具有3´磷酸酶活性。

可用于DNA/RNA进行5´磷酸化，以用于后续的连接反应；DNA或RNA的末端标记；对3´磷酸化的单核苷酸进行5´磷酸化，生成底物（pNp），该底物可通过连接酶活性添加到DNA或RNA的3´末端；对3´磷酸化的寡核苷酸进行5´末端标记。

来源于大肠杆菌菌株，携带有T4嗜菌体多聚核苷酸激酶突变体。

活性定义：37℃，30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。

使用说明

提高ATP的浓度可让缺口磷酸化。切刻位点不能有效地磷酸化。CTP、GTP、TTP、UTP、dATP及dTTP均可以替代ATP作为磷酸供体。

利用交换反应可以避免末端标记前的去磷酸化，尽管这会导致较低的标记比活性。

在反应体系中添加终浓度为100 µM ADP便仍可保持足够的掺入水平。要达到更高的掺入水平，请使用Sambrook, J. et al所描述的缓冲液。