Cre Recombinase

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包装内容

产品简介

Cre重组酶是来自噬菌体P1的I型拓扑异构酶，可催化loxP位点间DNA进行位点特异性重组。该酶不需要能量辅因子，Cre介导的重组可迅速在底物和反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一段34 bp的序列，包括两个13 bp的反向重复序列和中间的8bp间隔区域，该间隔区域赋予了它的定向性。重组产物取决于loxP位点的位置和相对方向。两个含有单loxP位点的DNA将被融合。两个正向重复loxP位点间的DNA将以环状形式切除，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。

来自于大肠杆菌菌株，携带有编码噬菌体P1的Cre重组酶的质粒。

可用于切除两个loxP位点之间的DNA；融合含有loxP位点的DNA分子；倒转两个loxP位点之间的DNA。

1单位指在37℃条件下，当总反应体积为50 μl时，30分钟能使0.25 μg的DNA产生最大位点特异性重组所需的酶量。可以通过琼脂糖凝胶电泳以及反应物转化后在氨苄青霉素抗性平板筛选来确定最大重组效果。

70°C孵育10分钟可热失活。

使用说明

建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。

由于Cre重组酶反应是一个平衡反应，仅有20-30% 生重组。由于重组产物的量较少，故溴化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。

延长温育时间不会提高重组效率，反而可能导致高分子量重组产物的生成。

增加反应中Cre重组酶的用量将形成loxP依赖型Cre-DNA聚集体，从而抑制重组反应。