TnpB-VGIRL(eTnpBe)蛋白

产品简介

TnpB-VGIRL（原名eTnpBe）是一种基于ISDra2 TnpB转座子关联核酸酶、通过深度突变扫描（DMS）和组合突变工程化改造的增强型RNA引导基因组编辑器。该变体携带V192L、L172G、L222I、P282V和I304R五个氨基酸替换，是在酵母体内筛选体系中从组合突变文库中鉴定出的高活性变体之一。TnpB-VGIRL在人类HEK293T细胞中实现23%–42%的插入缺失（indel）编辑效率，显著优于野生型ISDra2 TnpB（11%–29%）。在植物中，TnpB-VGIRL展现出卓越的编辑活性：在本氏烟草（Nicotiana benthamiana）中最高可达49%的indel频率（较野生型提升超50倍），在水稻稳定转化组织中达29.3%，在辣椒中达10%。与TnpB-KYLI相比，TnpB-VGIRL在部分位点（如NbDMR6）显示更优活性，且在HEK293T细胞中脱靶活性较低（<2%），是兼顾高效编辑与低脱靶风险的理想微型基因编辑工具。

产品特性

•           组合工程化改造：基于ISDra2 TnpB骨架，通过组合五个独立DMS鉴定的激活单点突变（V192L、L172G、L222I、P282V、I304R）构建而成

•           名称由来：VGIRL取自五个突变氨基酸（V: V192L, G: L172G, I: L222I, R: I304R, L: V192L）的首字母组合

•           超紧凑尺寸：ISDra2 TnpB蛋白约400个氨基酸，加上~116 nt的reRNA支架，整体RNP复合物尺寸极小，适合AAV和植物病毒载体递送

•           高效植物编辑：在N. benthamiana多个位点中，TnpB-VGIRL实现最高49%的indel频率（NbNDR1位点），较WT ISDra2 TnpB（<1%）提升超50倍；在NbDMR6位点实现23%编辑效率（WT仅4%），在NbWRKY40位点（38%）接近SpyCas9水平（39%）

•           低脱靶活性：在HEK293T细胞预测脱靶位点中，TnpB-VGIRL脱靶编辑率<2%，是所有测试组合变体中脱靶活性最低的，兼顾高效编辑与高特异性

•           广谱作物适用性：在水稻（Oryza sativa）稳定转化愈伤组织再生植株中实现高达29.3%的编辑效率（OsHMBPP位点）；在辣椒（Capsicum annuum）叶片中达10%编辑效率（CaAGO2位点）

•           哺乳动物细胞活性：在HEK293T细胞四个内源位点（TET1、PGK1、AGBL1、VEGFA）中，indel频率达23%–42%，超越WT ISDra2 TnpB和ISYmu1 TnpB

•           TAM识别：识别5′-TTGAT-3′ TAM，与Cas9的NGG PAM正交，拓展编辑靶点范围

产品参数

应用场景

•           高特异性植物基因组编辑：凭借低脱靶特性，适用于对特异性要求较高的植物性状改良和功能基因研究

•           病毒载体介导的植物育种：凭借超紧凑尺寸，适用于通过植物RNA病毒进行无转基因、可遗传的植物基因组编辑

•           农作物性状改良：适用于水稻、辣椒、番茄、大豆等作物的精准性状改良，尤其适合需要高编辑效率与低脱靶的品种

•           AAV介导的体内基因治疗：超紧凑尺寸适合包装入AAV载体，用于体内基因敲除和调控

•           多重基因组编辑：可与TnpB-KYLI或不同CRISPR系统联用，按位点特性选择最优编辑器

文献参考

Thornton, B. W., Weissman, R. F., Rodriguez, J. E., Tran, R. V., Duong, B. T., Terrace, C. I., Nagalakshmi, U., Austin, G., Groover, E. D., Wang, F. Z., Park, J.-U., Georgieva, V., Tartaglia, J., Cho, M.-J., Dinesh-Kumar, S. P., Doudna, J. A., & Savage, D. F. (2026). Engineered TnpB genome editors for plants and human cells identified by ribonucleoprotein mutational scanning. Nature Biotechnology. https://doi.org/10.1038/s41587-026-03059-7