TnpB-KYLI(eTnpBc)蛋白

产品简介

TnpB-KYLI（原名eTnpBc）是一种基于ISDra2 TnpB转座子关联核酸酶、通过深度突变扫描（DMS）和组合突变工程化改造的增强型RNA引导基因组编辑器。该变体携带N4Y、R110K、V192L和L222I四个氨基酸替换，是在酵母体内筛选体系中从组合突变文库中鉴定出的高活性变体之一。TnpB-KYLI在人类HEK293T细胞中实现23%–42%的插入缺失（indel）编辑效率，显著优于野生型ISDra2 TnpB（11%–29%）和ISYmu1 TnpB（6%–30%）。在植物中，TnpB-KYLI展现出卓越的编辑活性：在本氏烟草（Nicotiana benthamiana）中最高可达55%的indel频率（较野生型提升超50倍），在水稻稳定转化组织中达25.3%，在辣椒中达10%。凭借其超紧凑的蛋白尺寸（约400个氨基酸）和高效的植物编辑能力，TnpB-KYLI为病毒载体介导的植物育种和细胞治疗应用提供了理想的微型基因编辑工具。

产品特性

•           组合工程化改造：基于ISDra2 TnpB骨架，通过组合四个独立DMS鉴定的激活单点突变（N4Y、R110K、V192L、L222I）构建而成，显著提升催化活性

•           名称由来：KYLI取自四个突变氨基酸（K: R110K, Y: N4Y, L: V192L, I: L222I）的首字母（按突变位置顺序排列的字母组合）

•           超紧凑尺寸：ISDra2 TnpB蛋白约400个氨基酸，加上~116 nt的reRNA支架，整体RNP复合物尺寸极小，适合腺相关病毒（AAV）和植物病毒载体递送

•           高效植物编辑：在N. benthamiana多个位点中，TnpB-KYLI实现最高55%的indel频率（NbNDR1位点），较WT ISDra2 TnpB（<1%）提升超50倍；在NbWRKY40位点（38%）接近SpyCas9水平（39%）

•           作物适用性广：在水稻（Oryza sativa）稳定转化愈伤组织再生植株中实现高达25.3%的编辑效率（OsHMBPP位点）；在辣椒（Capsicum annuum）叶片中达10%编辑效率（CaAGO2位点）

•           哺乳动物细胞活性：在HEK293T细胞四个内源位点（TET1、PGK1、AGBL1、VEGFA）中，indel频率达23%–42%，超越WT ISDra2 TnpB和ISYmu1 TnpB

•           TAM识别：识别5′-TTGAT-3′ TAM（转座子关联基序），与Cas9的NGG PAM正交，拓展编辑靶点范围

•           特异性：在N. benthamiana预测脱靶位点中，编辑水平与WT相当或更低，表明工程化变体保持了靶向特异性

产品参数

应用场景

•           病毒载体介导的植物育种：凭借超紧凑尺寸，适用于通过植物RNA病毒（如烟草脆裂病毒TRV）进行无转基因、可遗传的植物基因组编辑

•           农作物性状改良：适用于大豆、水稻、辣椒、番茄等双子叶及单子叶作物的精准性状改良与功能基因研究

•           AAV介导的体内基因治疗：超紧凑尺寸适合包装入AAV载体，用于体内基因敲除和调控

•           多重基因组编辑：可与不同TnpB变体或CRISPR系统联用，扩展编辑靶点范围

•           基础研究：用于植物和哺乳动物细胞中的基因功能研究、信号通路解析

文献参考

Thornton, B. W., Weissman, R. F., Rodriguez, J. E., Tran, R. V., Duong, B. T., Terrace, C. I., Nagalakshmi, U., Austin, G., Groover, E. D., Wang, F. Z., Park, J.-U., Georgieva, V., Tartaglia, J., Cho, M.-J., Dinesh-Kumar, S. P., Doudna, J. A., & Savage, D. F. (2026). Engineered TnpB genome editors for plants and human cells identified by ribonucleoprotein mutational scanning. Nature Biotechnology. https://doi.org/10.1038/s41587-026-03059-7