DH5α化学感受态细胞

感受态细胞名称：DH5α Competent Cells；DH5α感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： LB培养基。

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁹ cfu/µg pUC19

基因型：F^- Φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(r_k^-, m_k⁺) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-

抗性：无抗性

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：质粒克隆

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞，广泛用于基因克隆，质粒扩增等；

n  核酸内切酶(endA)缺陷，提高了质粒DNA的产量和质量；

n  重组酶(recA) 缺陷，减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；

n  lacZΔM15可用于菌落蓝、白斑筛选；

n  不适合克隆不稳定DNA。

简化转化步骤

1.         取DH5α感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。