Recombinase Polymerase Amplification Kit

-20℃储存，干冰运输。

包装内容：

产品简介：

依赖于T4 UvsX重组酶介导引物与双链DNA同源区发生链交换，单链DNA结合蛋白gp32稳定重组结构，以及常温链置换聚合酶Bsu。

常温扩增反应，扩增长度可达1kb。

适用于即时诊断POCT以及二代测序NGS扩增。

可配合抗原/荧光探针进行核酸检测反应。

使用说明：

RPA反应体系

管盖上分开加入MgOAc和模板DNA，颠倒6次混匀后短暂离心，于37-42ºC孵育20-40分钟。

注意：MgOAc加入后RPA反应即行开始。对于低拷贝数模板扩增，可于4分钟后再次颠倒混匀反应一次。

常见问题及建议

1.      最优反应温度为37-42℃；高温导致酶活降低而低温降低反应速率。

2.      本反应为MgOAc即时启动。

3.      需严格遵循PCR操作规程以避免模板污染。

4.      反应优化参数：

（1）    MgOAc终浓度范围为12-30mM，高浓度MgOAc能提高反应速率；

（2）    引物浓度范围为150-600nM，探针oligo浓度范围为50-150nM，总寡聚核苷酸浓度范围为750-2000nM。低浓度引物有助于扩增长产物及提高实时分辨率，高浓度能提高反应速率；

5.      可配合合适反转录酶/RNA核酸酶抑制剂进行RNA模板扩增反应。

6.      引物设计原则：

（1）    最优引物长度为30-35nt；

（2）    GC含量为30-70%；

（3）    避免重复序列，发卡环结构和引物二聚体。

（4）    建议实验筛选以确定最优引物。

7.      建议扩增长度<500bp，最好在100-200bp之间。

8.      反应可以通过加热（85℃）或者镁离子螯合剂终止。